链霉菌噬菌体1010和P13启动子在大肠杆菌中的克隆和表达

摘要

将螺旋链霉菌噬菌体1010和红霉菌噬菌体P13的San3A和HindⅢ酶切片段分别插入启动子探测质粒pGA46的BgIⅡ和HindⅢ位点,在大肠杆菌中获得了氯霉素抗性、四环素抗性的重组质粒。限制性内切酶酶切产物的电泳分析和DNA分子杂交分析结果表明重组质粒确由载体pGA46和噬菌体酶切片段连接而成。以限制性内切酶HindⅢ、BamHⅠ、EcoRⅠ、PstⅠ、SolⅠ等对重组质粒进行酶切分析,并应用限制性内切酶和核酸酶BAl-31酶切重组质粒pSS31中的噬菌体DNA插入顺序。得到分子量由1.2Kb缩短至0.25Kb而仍保留启动子功能的片段,用大肠杆菌的启动子探测质粒pGA46作为载体分别克隆于San3A和HindⅢ酶切的大肠杆菌的启动子和探测质粒,在含有抗生素的培养基上分别选择T_c^r和C_m^r转化子。