肠杆菌科细菌喹诺酮耐药基因qnrB的研究

摘要

目的 对2005年10月～2006年4月临床分离的120株肠杆菌科细菌检测qnrB的分布,同时研究qnr阳性菌株与blaSHV、bhtCTX-M或质粒型AmpC β-内酰胺酶基因的关系,为进一步研究质粒介导的喹诺酮类耐药机制(PMQR)提供实验依据.方法 采用碱裂解变性法提纯质粒DNA,PCR法检测qnrA和qnrB的存在,接合实验验证qnr的转移性.扩增qnrB全序列、测序.对所有qnr阳性菌株,采用nitrocefin法检测qnr阳性菌产β-内酰胺酶情况,多重PCR法检测blaSHV、btaCTX-M及多种质粒型AmpC β-内酰胺酶基因.结果 120株肠杆菌科细菌中,qnrA和qnrB的检出率分别为30.8%与27.5%,其中13株细菌同时检出qnrA和qnrB;肠杆菌属、克雷伯菌属细菌及大肠埃希菌qnr的检出率分别为52.9%、59.3%和50.0%.17株细菌可扩增出681bp的全序列片段.测序结果显示,部分菌株包含qnrBl;另有4株细菌的qnrB序列相同,但与qnrB3相比存在3个位点核苷酸序列突变(201位A→T,271位T→G,498位G→A)而导致编码蛋白的氨基酸存在2个位点差异,为新的qnrB亚型(qnrB6),GenBank注册号为:EF520349.所有qnr阳性菌均可使nitrocefin纸片变红色.qnr阳性菌中,49株(89.1%)包含blaSHV或blaCTX-M;约70.0%可检测到质粒型AmpC相关的β-内酰胺酶基因,分别有18和16株细菌可扩增到blaDHA及blaEBC.结论 我院临床存在qnr阳性菌株的流行,发现一种新的qnrB亚型(qnrB6).