牦牛KDM4A基因克隆、组织表达谱及其在卵母细胞和颗粒细胞中的表达

摘要

本研究旨在阐明牦牛KDM4A基因的表达特性及其在牦牛卵母细胞和颗粒细胞中的作用.采集牦牛心、肝、脾、卵巢、肺、肾、睾丸、小肠、子宫、胃、大脑组织,以GenBank上已发布的黄牛KDM4A基因序列设计引物,利用RT-PCR方法扩增克隆牦牛KDM4A基因及检测其在牦牛各组织中的表达谱,并使用在线软件ExPASY分析KDM4A基因的结构和功能.采用实时荧光定量PCR法检测牦牛不同时期卵母细胞和颗粒细胞中KDM4A基因的表达水平.结果表明,本研究克隆得到牦牛KDM4A基因3 289 bp的cDNA序列.牦牛KDM4A核苷酸序列与其它哺乳动物的遗传距离较近,表明KDM4A基因在进化中较为保守.牦牛KDM4A基因CDs区为3 201 bp,编码[066个氨基酸残基,相对分子质量122.48 ku.KDM4A蛋白为亲水不稳定的酸性蛋白,无跨膜区和信号肽,二级结构主要包含α-螺旋和无规卷曲,与三级结构分析结果一致.KDM4A基因在所选牦牛组织样本中均有表达,其中在卵巢、脾和睾丸中表达量最高.牦牛KDM4A mRNA在MⅡ期颗粒细胞中表达量显著高于在MⅠ期和GⅤ期颗粒细胞中的表达量(P＜0.05),GⅤ期卵母细胞中,KDM4A mRNA的表达水平显著高于在MⅠ期和MⅡ期卵母细胞中的表达量(P＜0.05).综上表明,本研究成功克隆了KDM4A基因及其在牦牛卵母细胞和颗粒细胞成熟过程中mRNA表达水平的差异,表明KDM4A基因在卵母细胞及颗粒细胞成熟过程中发挥一定作用.