小鼠TLE4基因启动子克隆及分析

摘要

本研究旨在初步对小鼠TLE4基因的转录调控机制进行探讨.利用PCR方法扩增TLE4基因5'上游启动区2849 bp(-2521 bp～+327 bp)的片段,然后通过步移缺失获得了7段长度不等的启动子片段并分别克隆到荧光素酶(LUC)报告基因表达质粒中.通过双荧光素酶报告活性分析检测TLE4基因启动子区不同长度片段在小鼠畸胎瘤细胞(F9)及小鼠胚胎干细胞(ES)中瞬时转染后的活性.2种细胞的检测结果显示,在TLE4基因启动子区(-2521 bp～-2137 bp)存在负性调控元件,而在启动区(-2137 bp～-1794 bp)活性最强.对TLE4基因启动区(-2137 bp～-1794 bp)进一步缺失分析发现在该基因启动区(-2027 bp～-1927 bp)活性较强,分析预测该序列含有一个功能性的(HSF)的结合位点.结果推测HSF对TLE4基因的表达调控及功能行使具有重要作用.