bta-miR-1通过调控PAX7参与骨骼肌发育的功能研究

摘要

本研究旨在探究牛miR-1(bta-miR-1)参与调控肉牛骨骼肌发育的分子机制.通过采集布莱凯特黑牛和鲁西黄牛的背最长肌进行sRNA建库,筛选与肉牛骨骼肌发育相关的bta-miR-1,采用生物信息学方法鉴定其保守性和预测其靶基因PAX7;为验证bta-miR-1的功能:在成肌细胞中转染bta-miR-1模拟剂/阴性对照(bta-miR-1 mimic/NC)和bta-miR-1抑制剂/阴性对照(bta-miR-1 inhibitor/NC),48 h后用2％马血清诱导观察肌管分化过程,CCK-8检测细胞增殖率,qRT-PCR检测细胞增殖分化标记基因PCNA、CDK2、Myog、Myod1以及靶基因PAX7的表达量.结果表明,转染bta-miR-1 mimic促进肌管分化,降低细胞的增殖率(P<0.01),抑制靶基因PAX7的表达(P<0.01),转染bta-miR-1 inhibitor则抑制肌管分化,增加细胞的增殖率(P<0.05),促进靶基因PAX7表达(P<0.01);在细胞增殖方面,转染bta-miR-1 mimic降低其标记基因PCNA、CDK2的表达量(P<0.01),抑制组则相反;在细胞分化方面,转染bta-miR-1 mimic增加其标记基因Myog、Myod1的表达量(P<0.01),抑制组则相反.综上,bta-miR-1可能通过负调控靶基因PAX7促进成肌细胞分化、抑制成肌细胞增殖而参与骨骼肌的发育过程.