中国实验用小型猪MC3R基因的CRISPR/Cas9敲除载体构建与验证

摘要

黑素皮质素受体(melanocortin receptors,MCRs)属于G-蛋白偶联受体家族,在黑素皮质素(melanocortin)刺激下,通过cAMP启动胞内信号.MCRs各成员表达于不同类型细胞,生理作用迥异,其中MC3R在控制动物食欲和调节能量平衡中发挥重要作用,但作用机理不明.猪的采食与能量分配对猪生长速度、胴体瘦肉率等经济性状具有重要影响,对MC3R基因敲除的研究不仅可以用于明确MC3R的生理作用,还可以评估其在猪分子育种中的价值.本文采用新型基因组编辑技术CRISPR/Cas9系统,基于中国实验用小型猪(chinese experimental mini pig,CEMP)MC3R基因序列信息,在其起始密码子的上游12 bp和终止密码子下游45 bp设计靶位点,构建4个pX330MC3R基因敲除栽体,以CEMP成纤维细胞为材料,验证4个载体均实现高效特异性切割,为构建MC3R基因敲除猪奠定了基础.