非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

摘要

本研究参考非洲猪瘟病毒(ASFV)国内分离株SY18株的CP204L基因(编码p30蛋白),进行人源偏嗜性密码子优化,并分别构建表达载体pET-32a-p30和pCMV-2×Flag-p30。利用原核表达系统获得pET-32a-p30重组蛋白,并以该融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠制备了抗ASFV p30蛋白的单克隆抗体。SDS-PAGE分析发现,在16℃、1 mmol/L IPTG条件下诱导6 h后,该p30重组蛋白主要表达在包涵体中且表达量中等,蛋白分子量约为48 kDa。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)、蛋白印迹法(Western blot)和间接免疫荧光法(IFA)检测获得的单克隆抗体3C2和4A3。结果显示,两株单克隆抗体均具有良好的免疫特性,且3C2株具有Western blot效价。本研究中p30原核重组蛋白及其单克隆抗体的制备为进一步探究p30磷酸化修饰及功能解析奠定基础,并为ASFV特异性诊断技术提供了必要的生物材料。