阿龙山病毒VP2蛋白原核表达纯化以及抗原性鉴定

摘要

阿龙山病毒(ALSV)是一种新发现的分节段黄病毒,可通过蜱虫叮咬感染家畜和人。为了获得高纯度ALSV-VP2蛋白,利用密码子优化软件对ALSV H3株VP2蛋白质氨基酸序列进行优化。将优化后的基因克隆到原核表达载体pET-30a中,构建重组质粒pET30a-VP2,重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)表达菌株利用IPTG、16℃低温诱导,表达的蛋白再通过亲和层析(Ni-IDA树脂)得到纯度较高ALSV-VP2蛋白。SDS-PAGE电泳结果显示,在27 kDa处出现目的条带,与预期相符合,BCA检测蛋白浓度为0.236 mg/mL,证明ALSV-VP2蛋白在大肠杆菌中高效表达。经Westen blot分析,该重组蛋白具有良好特异性。本研究为ALSV的流行病学监测和致病机制研究奠定基础。