LPS攻击大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞时HO-1/CO信号通路与线粒体分裂的关系

摘要

目的 评价LPS攻击大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）时血红素氧合酶-1/一氧化碳（HO-1/CO）信号通路与线粒体分裂的关系。方法 大鼠AECⅡ进行传代培养,待其分裂至合适浓度（约2×105个/ml）时接种于96孔板。采用随机数字表法将细胞分为7组（n＝12）：空白对照组（C组）继续培养,不做任何处理；LPS组（L组）采用10 μg/ml LPS孵育；一氧化碳释放分子-2（CORM-2）＋LPS组（CL组）、HO-1诱导剂Hemin＋LPS组（HL组）、HO-1抑制剂ZnPP-Ⅸ＋LPS组（ZL组）分别采用100 μmol/L CORM-2孵育1 h、20 μmol/L Hemin孵育1 h以及10 μmol/L ZnPP-Ⅸ孵育0.5 h,而后用10 μg/ml LPS孵育；CORM-2＋ZnPP-Ⅸ＋LPS组（CZL组）：采用100 μmol/L CORM-2孵育1 h,而后用10 μmol/L ZnPP-Ⅸ孵育0.5 h,最后用10 μg/ml LPS孵育；Hemin＋ ZnPP-Ⅸ＋LPS组（HZL组）采用20 μmol/L Hemin孵育1 h,而后用10 μmol/L ZnPP-Ⅸ孵育0.5 h,最后用10 μg/ml LPS孵育。各组于培养或LPS孵育48 h时采用MTT检测细胞活力,采用Western bolt法检测HO-1、线粒体动力相关蛋白1（Drp1）和线粒体分裂蛋白1（Fis1）的表达。结果 与C组比较,其余6组细胞活力降低,HO-1、Drp1及Fis1表达上调（P＆0.05）。与L组比较,CL组和HL组细胞活力升高,HO-1表达上调,Drp1及Fis1表达下调,ZL组细胞活力降低,HO-1表达下调,Drp1及Fis1表达上调（P＆0.05）,CZL组和HZL组上述指标差异无统计学意义（P＆0.05）。与CL组和HL组比较,ZL组细胞活力降低,HO-1表达下调,Drp1及Fis1表达上调（P＆0.05）。结论 HO-1/CO信号通路可抑制线粒体分裂,在LPS诱导大鼠AECⅡ损伤时发挥内源性保护作用。