小鼠透明带结合蛋白sp38在大肠杆菌中的融合表达和纯化

摘要

目的表达及纯化小鼠透明带结合蛋白sp38.方法从BALB/C小鼠睾丸组织提取总RNA,利用RT-RCR技术扩增sp38基因编码区序列,并将其重组到含麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合蛋白原核表达载体pMAL-c2x中,在大肠杆菌中进行表达.结果序列测定表明克隆获得的sp38全长与基因库所登录的序列一致.经IPTG诱导表达出的MBP-sp38融合蛋白分子量约88 kD,经Western blot分析证实.经直链淀粉琼脂糖凝胶(amylose resin)亲和层析和Sephadex G-100分子筛层析纯化后,MBP-sp38纯度达90%.结论成功地获得sp38蛋白,为进一步研究其生物学性能和用于免疫避孕的可能性打下了基础.