高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用测定DNA分子中4种脱氧核苷酸

摘要

建立了用反相离子对色谱和电感耦合等离子体质谱的联用技术同时测定DNA分子中4种脱氧核苷酸的含量.液相流动相最佳条件是:pH 4.8, 甲醇2.5%,10 mmol/L NH4Ac.为了避免直接测定31P时14N16O1H+,15N16O+等复合离子的干扰造成信噪较差的问题,利用碰撞/反应池技术(CCT)加入O2和31P生成31P16O复合离子后测定该复合离子的信号可提高测定磷的信噪比.使用该联用技术测定4种脱氧核苷酸的检出限分别为0.211 μmol/L (dCMP)、0.204 μmol/L (dTMP)、0.173 μmol/L (dGMP)和0.225 μmol/L (dAMP),并且测定经过核酸酶酶解的质粒DNA后生成的4种脱氧核苷酸的含量分别是:152.9±2.4 μmol/L(dCMP)、 228.2±4.0 μmol/L(dTMP)、 125.3±3.0 μmol/L(dGMP)和222.9±3.3 μmol/L(dAMP).