小麦印度腥黑穗病菌的分子检测

摘要

根据GenBank中登录Tilletia属的20个种的核糖体转录间隔区(ITS)序列差异设计1对引物T1/T2,可以特异地从T.indica和T.walkeri菌株中扩增到一条450 bp左右的条带,而从其他供试菌株中不能扩增出条带,表明该对引物可以将这二个种与Tilletia其他种区分开.进一步根据T.indica和T.walkeri的线粒体DNA序列的差异设计一对引物M1/M2,只能特异地从T.indica DNA中扩增到一条250 bp左右的条带,表明该对引物可以将T.indica与T.walkeri区分开.利用上述2对引物分别与ITS区通用引物ITS1/ITS4和线粒体引物Ti-1/Ti-4组合建立套式PCR检测体系,能够直接将T.indica与其他相似或相关种区分开,且灵敏度可达1个冬孢子.此外,还观察到在反应体系中加入适量的(NH4)2SO4对PCR反应具有增效作用,可以提高检测灵敏度.上述结果提示建立的套式PCR反应体系可望能应用于口岸对T.indica的检疫.