套式PCR

摘要： 于2020年9月,采用套式PCR方法,对辽宁省大连市沙山、仙浴湾、大郑等8个地区日本对虾血细胞虹彩病毒(SHIV)、白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、急性肝胰腺坏死病致病性副溶血弧菌(VP_(AHPND))和虾肝肠胞虫(EHP)5种病原携带情况进行检测。结果表明:WSSV和EHP阳性检出率相对较高,分别为10.83%和8.92%;IHHNV、SHIV和VP_(AHPND)阳性率分别为7.01%,5.73%和2.55%。此外,沙山和仙浴湾的SHIV阳性检出率最高,大郑的WSSV和VP_(AHPND)阳性率最高,仙浴湾和沙山的IHHNV和EHP阳性率最高。

摘要： 为了解中国东北虎源猫免疫缺陷病毒(FIV)的感染情况,采集海林市横道河子东北虎林园东北虎全血样本50份,通过套式PCR对样本进行FIV pol基因扩增,并对阳性样本进行测序,再运用生物信息学软件进行遗传进化分析。结果检测出1只虎为FIV阳性,其pol基因与参考毒株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为70.0%~99.8%和75.0%~99.4%,且存在39个氨基酸突变位点,系统发育树显示其与A亚型猫源FIV CHN17毒株亲缘关系最近。这是中国首次从东北虎体内检测到FIV,表明对中国大型猫科动物进行FIV的监测的必要性,同时应该注意对圈养老虎栖息地周围流浪猫的管理。

摘要： 为了建立一种高灵敏度和强特异性的羊多杀性巴氏杆菌与布鲁氏菌的双重检测方法,根据多杀性巴氏杆菌kmt1基因序列和布鲁氏菌BCSP31基因序列分别设计了内外两对引物,构建了双重套式PCR检测方法。结果表明,该方法可以特异性扩增kmt1和BCSP31片段,并能从多种组织样本的DNA中准确检测到多杀性巴氏杆菌与布鲁氏菌的核酸片段。检测沙门氏菌、猪链球菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、海藻糖巴氏杆菌和斯氏假单胞菌均为阴性;对于kmt1的检测下限为70.9 copies/μL,对于BCSP31检测下限为89.5 copies/μL;用于检测动物的组织样本符合率为100%。建立的方法有良好的敏感性、特异性和适应性,可以用于动物检疫诊断。

摘要： 为了解云南鸽子血变原虫的感染情况,对采自玉溪地区的324只鸽子血样用套式PCR方法对线粒体细胞色素b(cytochrome b,cyt b)基因进行扩增,经测序比对分析,结果检出12份阳性样本,阳性率为3.70%;获得的序列与GenBank上公布的鸽血变原虫序列相似性达98%以上,运用MEGA6.0构建系统发育进化树,发现与鸽血变原虫虫株位于同一进化支。该调查结果为云南玉溪鸽子血变原虫的防控提供了数据支撑。

摘要： [目的]了解新疆部分地区规模化猪场猪囊等孢球虫的感染情况。[方法]基于猪囊等孢球虫SSU rDNA基因位点设计引物,采用套式PCR法对采集自新疆7个规模化猪场的801份猪新鲜粪便DNA样本进行检测;对不同养殖场、不同年龄段猪的猪囊等孢球虫感染率进行比较分析,对获得的SSU rDNA序列进行比对分析并构建种系发育进化树。[结果]调查猪场中猪囊等孢球虫感染率为5.74%(46/801),以沙雅县养殖场感染率最高,为14.00%(14/100),不同养殖场猪囊等孢球虫感染率统计学差异极显著(χ^(2)=27.081,df=6,P<0.01)。未断奶仔猪、断奶仔猪、育肥猪和母猪的猪囊等孢球虫感染率分别为14.79%(25/169)、5.78%(13/225)、2.31%(4/173)和1.71%(4/234),不同年龄段猪的猪囊等孢球虫感染率统计学差异极显著(χ^(2)=36.366,df=3,P<0.01)。序列比对和种系发育分析显示,获得的46条猪源囊等孢球虫SSU rDNA序列与安徽省凤阳县猪源猪囊等孢球虫分离株(GenBank登录号:KX808495)SSU rDNA序列的同源性均为100%,处于同一个亚群。[结论]新疆部分地区规模化猪场猪囊等孢球虫感染较常见,应加强检测和防治工作。

摘要： 为了解河南省屠宰场生猪肉孢子虫病流行情况,于2018年6月—2019年10月,采用猪源肉孢子虫双重套式PCR检测试剂盒对采自河南省11个地区62个屠宰场的2038份样品进行肉孢子虫的检测分析。结果显示:肉孢子虫阳性屠宰场37个,场阳性率59.7%,阳性样品599份,样品平均阳性率为29.4%;规模场(存栏500头以上)阳性率为27.7%,散养户(存栏500头以下)阳性率为32.3%,且二者差异显著(P<0.05);阳性样品均为米氏肉孢子虫,未检测到猪人肉孢子虫;不同季节肉孢子虫阳性率差异不显著,春季最高、为33.8%,冬季最低,为26.1%。本研究结果为猪肉孢子虫病防控了提供重要参考依据。

摘要： 猪瘟是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高致死性、烈性传染病,是危害养猪业的重要传染性疫病之一.结合文山州内基层兽医实验室的检测水平,通过建立猪瘟套式PCR(Nest-PCR)方法,可快速检测猪瘟病毒核酸,为猪瘟防控提供重要的科学依据.

摘要： 为快速检测猪圆环病毒3型(PCV3),根据PCV3全基因组保守区域设计特异性引物,建立PCV3套式PCR检测方法,并对采自安徽省部分地区的528份猪临床样品进行检测.结果显示,建立的方法仅对PCV3检测阳性,最低检测限为1.74×10拷贝/μL,与商品化检测试剂盒的符合率高;临床样品中PCV3总阳性检出率为20.45％(108/528).建立的PCV3套式PCR方法可用于PCV3的临床样品检测.

摘要： 山东省某一大型父母代肉种鸡场饲养的肉鸡在约44周龄时证实发生鸡毒支原体(MG)感染.为评价有关敏感药物对MG感染的治疗效果,经对该场分离的MG毒株进行最低抑菌浓度(MIC)测定,选择敏感药物恩诺沙星和泰妙菌素实施对比性治疗,采用套式PCR检测治疗1个疗程后肉种鸡所产种蛋和种蛋孵化后期死胚中的MG感染情况,计算感染率.MIC测定结果显示:MIC≤5μg/mL的药物中,敏感性从高到低依次是沃尼妙林、强力霉素、泰妙菌素、恩诺沙星、大观霉素、泰乐菌素和氟苯尼考.对比性治疗结果显示:恩诺沙星和泰妙菌素两种药物不能完全清除MG对种蛋的感染,但可减少MG的种蛋传播,与未治疗的对照组相比感染率下降极其明显(P=0.006,0.05),表明两种药物治疗效果相近.结果表明:恩诺沙星和泰妙菌素两种药物对MG感染治疗有效,而且效果相近;通过套式PCR检测,计算种蛋或孵化后期死胚的MG感染率能直接、快速筛选出阻止或减少MG经蛋传播的敏感药物,评价不同抗菌药物的治疗效果.本研究为种鸡场MG感染和防控效果评价模式的建立提供了参考.

摘要： 目的：研究不同日龄肉鸭检测鸭黄病毒特异性目标片段的问题。方法：随机选取无临床症状的4日龄、12日龄,20日龄、28日龄的鸭子各2一只，同时选取发病的36日龄和44日龄的鸭子各2只，采用套式PCR方法，检测鸭黄病毒特异性目标片段。结果：不同日龄的肉鸭黄病毒特异性不同，且日龄越大病毒感染率越高。结论：鸭黄病毒存在垂直传播的问题，而且入孵正在发病时期种鸭群的种蛋是污染商品肉鸭群的主要原因。

摘要： 目的：研究不同日龄肉鸭检测鸭黄病毒特异性目标片段的问题。方法：随机选取无临床症状的4日龄、12日龄,20日龄、28日龄的鸭子各2一只，同时选取发病的36日龄和44日龄的鸭子各2只，采用套式PCR方法，检测鸭黄病毒特异性目标片段。结果：不同日龄的肉鸭黄病毒特异性不同，且日龄越大病毒感染率越高。结论：鸭黄病毒存在垂直传播的问题，而且入孵正在发病时期种鸭群的种蛋是污染商品肉鸭群的主要原因。

摘要： 目的：研究不同日龄肉鸭检测鸭黄病毒特异性目标片段的问题。方法：随机选取无临床症状的4日龄、12日龄,20日龄、28日龄的鸭子各2一只，同时选取发病的36日龄和44日龄的鸭子各2只，采用套式PCR方法，检测鸭黄病毒特异性目标片段。结果：不同日龄的肉鸭黄病毒特异性不同，且日龄越大病毒感染率越高。结论：鸭黄病毒存在垂直传播的问题，而且入孵正在发病时期种鸭群的种蛋是污染商品肉鸭群的主要原因。

摘要： 目的：研究不同日龄肉鸭检测鸭黄病毒特异性目标片段的问题。方法：随机选取无临床症状的4日龄、12日龄,20日龄、28日龄的鸭子各2一只，同时选取发病的36日龄和44日龄的鸭子各2只，采用套式PCR方法，检测鸭黄病毒特异性目标片段。结果：不同日龄的肉鸭黄病毒特异性不同，且日龄越大病毒感染率越高。结论：鸭黄病毒存在垂直传播的问题，而且入孵正在发病时期种鸭群的种蛋是污染商品肉鸭群的主要原因。

摘要： 根据GenBank数据库的单增李斯特菌iap基因设计2对引物,建立了套式PCR快速检测单增李斯特菌的方法.两对引物分别扩增出约1500bp和500bp片段,与预期大小一致.套式PCR方法灵敏性实验检测极限为101CFU/ml;人工污染猪肉检测极限为103CFU/ml;整个检测过程可在7h内完成.采用该法对南海口岸进口的冻肉进行检测,检测出9份阳性,与传统的细菌分离方法完全一致,说明套式PCR方法具有很好的特异性.

摘要： 根据GenBank数据库的单增李斯特菌iap基因设计2对引物,建立了套式PCR快速检测单增李斯特菌的方法.两对引物分别扩增出约1500bp和500bp片段,与预期大小一致.套式PCR方法灵敏性实验检测极限为101CFU/ml;人工污染猪肉检测极限为103CFU/ml;整个检测过程可在7h内完成.采用该法对南海口岸进口的冻肉进行检测,检测出9份阳性,与传统的细菌分离方法完全一致,说明套式PCR方法具有很好的特异性.

摘要： 根据GenBank数据库的单增李斯特菌iap基因设计2对引物,建立了套式PCR快速检测单增李斯特菌的方法.两对引物分别扩增出约1500bp和500bp片段,与预期大小一致.套式PCR方法灵敏性实验检测极限为101CFU/ml;人工污染猪肉检测极限为103CFU/ml;整个检测过程可在7h内完成.采用该法对南海口岸进口的冻肉进行检测,检测出9份阳性,与传统的细菌分离方法完全一致,说明套式PCR方法具有很好的特异性.

摘要： 根据GenBank数据库的单增李斯特菌iap基因设计2对引物,建立了套式PCR快速检测单增李斯特菌的方法.两对引物分别扩增出约1500bp和500bp片段,与预期大小一致.套式PCR方法灵敏性实验检测极限为101CFU/ml;人工污染猪肉检测极限为103CFU/ml;整个检测过程可在7h内完成.采用该法对南海口岸进口的冻肉进行检测,检测出9份阳性,与传统的细菌分离方法完全一致,说明套式PCR方法具有很好的特异性.

摘要： 根据GenBank登录的兔出血症病毒的全基因组序列,设计了2对引物.建立了检测兔出血症病毒的套式PCR检测方法.用该方法对12份可疑RHD样本进行了检测,阳性率为75﹪.结果表明,本套式PCR技术能很好应用于兔出血症病毒的检测,为快速、准确检测兔出血症病毒提供了一条新途径.

摘要： 根据GenBank登录的兔出血症病毒的全基因组序列,设计了2对引物.建立了检测兔出血症病毒的套式PCR检测方法.用该方法对12份可疑RHD样本进行了检测,阳性率为75﹪.结果表明,本套式PCR技术能很好应用于兔出血症病毒的检测,为快速、准确检测兔出血症病毒提供了一条新途径.

摘要： 本发明公开了同时鉴定三种猪流行性腹泻病毒毒株的引物组合，所述引物组合由4个特异性引物组成，分别为：上游引物F1、上游引物F2、上游引物F3、下游引物UR；并提供了使用上述引物组合的同时鉴定三种猪流行性腹泻病毒的通用型半套式RT‑PCR方法。本发明的有益效果为：本发明提供的同时鉴定三种猪流行性腹泻病毒毒株的引物组合和通用型半套式RT‑PCR方法，可以通过一种方法，在一次试验中同时鉴定并区别目前已报道出现的全部三种猪流行性腹泻病毒毒株，是世界上首次建立的一种能够同时检测三种不同基因型猪流行性腹泻病毒流行毒株的检测方法，为今后该病毒的鉴别及临床诊断提供新的、有效的检测方法。

摘要： 本发明属于分子检测技术领域，涉及一种能同时检测牛人五毛滴虫和巴特里四毛滴虫的双重套式PCR方法及应用，以人五毛滴虫和巴特里四毛滴虫阳性对照混合物为模板，以毛滴虫属特异性引物为扩增引物进行扩增，以第一轮PCR获得的扩增产物为模板，以人五毛滴虫种特异性引物和巴特里四毛滴虫种特异性引物的混合物为引物进行扩增，用于同时检测人五毛滴虫和巴特里四毛滴虫。本发明的方法能特异性地扩增人五毛滴虫和巴特里四毛滴虫目的片段，最低能检查到500fg/μL的阳性对照DNA。

摘要： 本发明属于基因型检测技术领域，公开了一种反转录多重套式PCR检测引物，引物包括两条外引物和三条内引物，外引物扩增YHV‑1和YHV‑8的目的基因，产生目的条带；三条内引物搭配分别特异性的扩增YHV‑1和YHV‑8，产生两种目的条带。本发明可灵敏的检测黄头病毒的致病基因型YHV‑1和YHV‑8，并通过产物大小鉴别两种基因型，用于制备上述病毒的鉴别、检测、监测等所需的反转录多重套式PCR的试剂或试剂盒，为该病毒的临床检测和流行病学研究提供了简便、可靠的技术支持。

摘要： 本发明属于动物疫病检测技术领域，具体涉及一种检测鸡滑液囊支原体的套式PCR引物、检测方法及试剂盒，所述PCR引物包括一对内套引物和一对外套引物，所述内套引物中的上游引物如SEQ ID NO.1所示，下游引物如SEQ ID NO.2所示；所述外套引物中的上游引物如SEQ ID NO.3所示，下游引物如SEQ ID NO.4所示。本发明通过两轮扩增可以克服单次扩增平台期效应的限制，使目的产物的扩增倍数大幅提高，对鸡滑液囊支原体的检测灵敏度高。

摘要： 本发明涉及一种用于检测猪急性腹泻冠状病毒的套式PCR引物及试剂盒，属于生物技术领域，所述套式PCR引物包括：(1)外套引物，包括SEQ ID No.1所示核苷酸序列的上游引物和SEQ ID No.2所示核苷酸序列的下游引物；(2)内套引物，包括SEQ ID No.3所示核苷酸序列的上游引物和SEQ ID No.4所示核苷酸序列的下游引物。本发明还提供包含上述套式PCR引物的试剂盒。本发明提供的套式PCR引物及试剂盒用于检测猪急性腹泻冠状病毒，兼具高灵敏度、便捷性和特异性强的优点。

摘要： 本发明提供用于检测猪捷申病毒的套式PCR引物、方法及试剂盒。本发明提供的试剂盒根据猪捷申病毒的高度保守的特异性序列设计多组套式PCR引物，并通过引物筛选以及反应体系优化，研制出一种检测灵敏性高、特异性好的套式PCR检测试剂盒。本发明提供的检测试剂盒只需要一台普通PCR仪，即可获得与实时荧光定量PCR相当的检测灵敏性，不仅可监测捷申病毒的微量潜伏感染，实现对猪捷申病的早期预警，同时检测成本低，对检测仪器设备与人员操作水平要求较低，利于在养殖生产一线得到应用和推广。

摘要： 本发明涉及生物技术技术领域，特别涉及一种检测猪Pegivirus的套式RT‑PCR引物组、试剂盒及应用。所述的检测猪Pegivirus的套式RT‑PCR引物组，其特征在于包含外围引物PPgV–F1、PPgV–R1，内围引物PPgV–F2、PPgV–R2，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～4所示，本发明还提供了一种包含上述引物组的试剂盒，该试剂盒采用一步法RT‑PCR和套式PCR相互配合，可高效、快速、特异地扩增目标序列，适用于疫病病原确诊和病原净化检测，例如：出入境现场、养殖场等。

摘要： 本发明提供用于检测猪非典型性瘟病毒的套式PCR引物、方法及试剂盒。本发明提供的试剂盒根据猪非典型性瘟病毒的高度保守的特异性序列设计多组套式PCR引物，并通过引物筛选以及反应体系优化，研发出一种检测灵敏性高、特异性好的套式PCR检测试剂盒。本发明提供的检测试剂盒只需要一台普通PCR仪，即可获得与实时荧光定量PCR相当的检测灵敏性，不仅可监测猪非典型性瘟病毒的微量潜伏感染，实现对猪非典型性瘟病毒的早期预警，同时检测成本低，对检测仪器设备与人员操作水平要求较低，利于在养殖生产一线得到应用和推广。

摘要： 本发明属于生物检测技术领域，具体涉及鸡传染性支气管炎病毒活疫苗的RT‑PCR分型检测引物及试剂盒。本发明所述的分型检测引物由序列如SEQ ID NO.1－2所示的通用引物和序列如SEQ ID NO.3－6所示的血清型特异性引物组成。本发明还公开了包含上述分型检测引物的试剂盒。利用本发明的引物和试剂盒，采用半套式RT‑PCR方法鉴别M型、4/91型、LDT3‑A型和QX型血清型传染性支气管炎病毒活疫苗，与常规PCR方法相比，具有更强的特异性和敏感性；还具有快速、高效、低成本的特点，可在5～6h内完成样品的检测，克服了传统血清中和试验的方法耗时较长的缺点，且该方法适合大批量样品的检测与分析。

摘要： 本实用新型公开了一种对虾虹彩病毒套式PCR检测存放箱，包括存放箱，所述存放箱的顶部设置有密封盖，所述存放箱内表面的底部设置有泡沫垫，所述泡沫垫的顶部均匀开设有放置槽，所述存放箱内表面的顶部固定连接有卡接组件，所述卡接组件的正面设置有连接组件，所述连接组件的一侧延伸至所述卡接组件的内部，本实用新型涉及检测存放箱技术领域。该对虾虹彩病毒套式PCR检测存放箱通过将试管放置在卡接组件和连接组件之间，在冷链运输的过程中，即使存放箱发生晃动，试管也稳定的被夹持住，保证了试管的安全，同时试管底部与泡沫垫接触，泡沫垫在为试管提供支撑的同时，也保护试管底部不会与其他物体发生碰撞，也保护了试管的安全。