草鱼肝细胞中细胞色素P450 3A的酶促动力学

摘要

用分光光度计法和反相高效液相色谱法研究了草鱼肝细胞系(GCL)中CYP3A探针酶类红霉素-N-脱甲基酶(ERND)和6β-睾酮羟化酶(6β-TOH)的酶促反应.药物利福平(RIF)在浓度为40μM时对CCL细胞中CYP3A活性具有显著诱导作用,而苯巴比妥(PB)和地塞米松(DEX)无显著诱导作用(P＜0.05).在低浓度底物条件下,对照组和40μMRIF诱导组GCL细胞中ERND的酶促动力学方程分别为1/V=234.08×1/[S]+2.6544和1/V=85.632 × 1/[S]+1.9458,613-TOH的酶促动力学方程分别为1/V=529.91×1/[S]+14.615和1/V=56.337×1/[S]+2.1017;酶动力学参数表明,RIF诱导的CYP3A亲和力较强,催化效能较高.当底物浓度进一步增高,CYP3A活性反而降低,致使动力学曲线偏离经典的米氏动力学曲线,该结果表明GCL细胞中CYP3A存在特殊的负协同效应,这一现象是对鱼类细胞色素P450(CYP)酶促动力学的有利补充.