建立基于报告基因的检测方法检测化合物G-CSF样活性

摘要

目的建立快速、灵敏、高效的基于报告基因的检测方法,基因水平检测化合物G-CSF样活性.方法将STAT3特异结合序列插入转录启始位点上游,选择氯霉素乙酰转移酶基因(CAT)和分泌型碱性磷酸酶(SEAP)作为报告基因,构建重组质粒,并将质粒转染入表达G-CSF受体的NFS-60细胞,通过检测报告基因的表达,检测化合物G-CSF样活性.结果 CAT的表达受rhG-CSF诱导并呈现剂量依赖关系,EC50等于0.044 nmol·L-1,而无关药物rhEPO不能诱导CAT表达.结论报告基因CATT的表达活性能够被其特异性配体强诱导表达,在96孔板上用ELISA法测定CAT基因的诱导表达水平,可检测G-CSF样活性的化合物.