实时定量PCR检测肺炎支原体2063位点点突变的方法学研究

摘要

背景肺炎支原体(MP)是儿童社区获得性肺炎的主要病原体,对目前常用治疗药物--大环内酯类抗生素的耐药率有升高趋势,而传统检测MP耐药株的方法耗时耗力.目的 建立一种快速诊断MP感染及耐药表型的新方法.方法 采用实时荧光定量PCR技术,以23S rRNA为靶序列,设计不同基因型探针及引物,构建阳性质粒,建立标准曲线.结果 实时荧光定量PCR检测敏感2063A质粒和耐药2063G质粒的下限分别为6和60拷贝数,特异性实验结果显示,仅生殖支原体出现扩增.与23S rRNA巢式PCR测序结果相比,实时荧光定量PCR鉴定43株MP临床分离株2063位点等位基因的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均为100%.12份鼻咽拭子标本实时荧光定量PCR MP阳性检出率为10/12,耐药率为4/12,1份标本同时发现2063A和2063G位点.结论 本研究初步建立了一种快速诊断MP感染并判断其耐药基因型的实时荧光定量PCR方法,具有较高的灵敏度.