尿路上皮癌相关基因1对磷脂酰肌醇3激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶信号通路和葡萄糖摄取的影响

摘要

目的观察长链非编码RNA（1ncRNA）尿路上皮癌相关基因1（UCA-1）对人肾上皮293T细胞的磷脂酰肌醇3激酶-丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（PI3K-Akt）信号通路及糖代谢的影响,并探索其中可能的分子机制。方法将293T细胞分为5组,即空白对照组、空质粒的阴性对照组、无义乱序RNA的阴性对照组（si-scr组）、过表达UCA-1组（UCA-1组）及沉默UCA-1组（si-UCA-1组）。通过转染UCA-1过表达质粒或UCA-1特异性小干扰RNA（siRNA）来干预293T细胞中的UCA-1水平。Western blotting法检测PI3K-Akt信号通路关键蛋白的表达变化,实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）和荧光素酶报告系统检测UCA-1对第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）的RNA水平和转录活性的影响,并通过2-脱氧-~3H-D-葡萄糖掺入法检测细胞的葡萄糖摄取能力。两组之间比较用t检验,多组之间比较采用单因素方差分析。结果（1）与对照组比较,UCA-1组PTEN的mRNA水平明显下降（1.07±0.05比0.24±0.05,t=14.257,P＜0.01）,而转染UCA-1特异性siRNA细胞中PTEN的mRNA水平明显上升（si-scr组比si-UCA-1组,1.02±0.03比12.47±0.17,t=15.816,P＜0.01）。（2）阴性对照组与UCA-1组比较,转染UCA-1过表达质粒PTEN的启动子转录活性降低:1.07±0.05比0.23±0.03（t=15.192,P＜0.01）,而转染UCA-1特异性siRNA后PTEN的启动子转录活性升高[si-scr与si-UCA-1比较,1.02±0.03比12.53±0.43（t=14.527,P＜0.01）]。（3）过表达UCA-1组细胞的葡萄糖摄取能力升高至对照组的（3.78±0.39）倍（t=6.711,P＜0.05）,同时转染PTEN过表达质粒可逆转这种作用（P＞0.05）。结论UCA-1可通过抑制PTEN激活293T细胞PI3K-Akt信号通路,并促进其葡萄糖摄取能力。