胰岛素对烧伤后心肌细胞损伤保护的初步研究

摘要

目的观察胰岛素对烧伤后乳鼠心肌细胞的保护作用。方法原代培养出生2 d SD乳鼠心肌细胞,并分为假伤组(Sham组)、烧伤组、胰岛素组和胰岛素活化抑制剂LY294002预处理组(LY组)。制备清洁级3月龄SD大鼠烧伤血清〔30%总体表面积(TBSA)Ⅲ度烫伤大鼠,术后6 h取腹主动脉血清〕诱导的SD乳鼠心肌细胞损伤模型;胰岛素组在细胞培养基中同时加入10%烧伤大鼠血清和10 U/L胰岛素;LY组先加入50μmol/L的LY294002后30 min,再加入烧伤血清和胰岛素。Sham组仅给予10%假伤大鼠血清(假伤大鼠仅置于37℃温水中)。各组细胞继续培养12 h后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定心肌细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和肌酸激酶(CK)含量;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测心肌细胞肌钙蛋白T(cTnT)蛋白表达;采用Hoechst 33258染色法检测心肌细胞凋亡情况。结果与Sham组比较,经烧伤血清诱导后,心肌细胞发生炎症反应及损伤,表现为TNF-α、IL-6、CK含量升高〔TNF-α(ng/L):273±48比21±6,IL-6(ng/L):416±83比44±11,CK(U/L):1.44±0.24比0.14±0.08,均P<0.01〕,cTnT蛋白表达下调(cTnT/β-actin:0.12±0.04比0.86±0.34,P<0.01),凋亡细胞增多〔(19.1±5.6)%比(5.2±1.3)%,P<0.01〕;胰岛素能够明显减轻烧伤血清诱导的心肌细胞损伤,TNF-α、IL-6和CK含量均较烧伤组明显降低〔TNF-α(ng/L):105±37比273±48,IL-6(ng/L):176±77比416±83,CK(U/L):0.82±0.26比1.44±0.24,均P<0.05〕,且cTnT蛋白表达明显上调(cTnT/β-actin:0.41±0.16比0.12±0.04,P<0.05),凋亡细胞明显减少〔(10.7±3.2)%比(19.1±5.6)%,P<0.05〕;而胰岛素活化抑制剂LY294002能够明显抑制胰岛素对损伤心肌的保护作用。结论在烧伤血清诱导的乳鼠心肌细胞损伤模型中,胰岛素可能通过抗炎、抗损伤和抑制凋亡等发挥细胞保护作用。