阿司匹林对血管紧张素Ⅱ诱导平滑肌细胞增殖的影响及其机制

摘要

目的:观察阿司匹林对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响及其机制.方法:采用组织贴块法培养人脐动脉平滑肌细胞,选3～9代细胞用于实验.①阿司匹林细胞毒性检测:实验分对照组和阿司匹林5 mmol/L组.两组培养24 h后,取上清液,用乳酸脱氢酶活性测定法,观察阿司匹林加入对细胞有无毒性.②阿司匹林抗增殖效果:实验分5组,对照组、Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ+阿司匹林0.5 mmol/L组、Ang Ⅱ+阿司匹林 1 mmol/L组和Ang Ⅱ+阿司匹林 2 mmol/L组.以上各组分别培养1 d、3 d、5 d后,采用四唑盐比色法测各孔的吸光值.③NO含量检测:实验分4组,对照组、阿司匹林2 mmol/L组、Ang Ⅱ组和Ang Ⅱ+阿司匹林2 mmol/L组.以上各组分别培养24 h后,收集细胞培养上清液按试剂盒说明书检测NO含量.④细胞周期检测:实验分3组,对照组、Ang Ⅱ组和Ang Ⅱ+阿司匹林2 mmol/L组.以上各组分别培养24 h后,收集细胞,用流式细胞仪检测细胞周期.结果:①与对照组比较, 阿司匹林5 mmol/L组细胞上清液中乳酸脱氢酶活性无明显升高(P>0.05).②阿司匹林(0.5、1、2 mmol/L)呈剂量依赖性地抑制脐动脉平滑肌细胞的增殖,抑制的最大效果在本实验内显示为2 mmol/L浓度的阿司匹林在培养第5天时,与Ang Ⅱ组比较有极显著性差异(0.27±0.01 vs 0.74±0.03,P＜0.01).③Ang Ⅱ刺激脐动脉平滑肌细胞24 h后,可降低细胞培养上清液中NO的含量,与对照组比较有显著差异[(54.08±5.69)μmol/L vs(70.27±3.99)μmol/L, P＜0.05];而加入阿司匹林2 mmol/L干预后,可升高上清液中NO的含量,与Ang Ⅱ组比较有极显著差异[(63.31±5.41)μmol/L vs(54.08±5.69)μmol/L, P＜0.01].④与Ang Ⅱ组比较,阿司匹林(2 mmol/L)可使细胞静止期/DNA合成前期(G0/G1期)的脐动脉平滑肌细胞所占比例显著升高[(62.05±1.55)% vs(48.72±2.31)%, P＜0.05],而DNA合成期(S期)细胞所占比例显著降低[(24.77±2.82)%vs(35.77±2.13)%, P＜0.05].结论:阿司匹林能呈剂量依赖性地抑制Ang Ⅱ诱导的脐动脉平滑肌细胞的增殖,抑制细胞在G0/G1期,促进脐动脉平滑肌细胞NO的产生.