不同生长因子对人胚胎脑海马区神经干细胞体外生长的影响

摘要

本研究比较了不同生长因子对人胚胎脑海马区神经干细胞(NSCs)体外生长的影响.取胎龄8～12周的人胚胎脑海马,按基础培养液中生长因子的不同将培养细胞分为:h-EGF组、h-bFGF组、h-EGF+h-bFGF组、h-EGF+h-LIF组、h-bFGF+h-LIF组、h-EGF+h-bFGF+h-LIF组,将机械分离的单细胞悬液以2×106个细胞/ml接种到上述组别,观察各生长因子的作用.结果发现,原代细胞培养6 h时,各组细胞情形区别不大;随培养时间的延长,h-EGF+h-bFGF组和h-EGF+h-bFGF+h-LIF组先形成许多小细胞簇,7 d后,这两组的细胞球数量进一步增加;而h-bFGF+h-LIF组和h-EGF+h-LIF组有较少的细胞球,h-bFGF组偶见小细胞球,h-EGF组细胞几乎全部死亡.将培养的h-EGF+h-bFGF+h-LIF组的神经干细胞用1%FBS诱导分化后,行免疫细胞化学鉴定.结果表明,诱导分化12 h时,细胞呈RNA-结合蛋白(Musashil)阳性,7 d时,细胞大部分呈β-Ⅲ-管蛋白(β-Ⅲ-tu-bulin)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性,极少数为半乳糖脑苷脂(Galc)阳性.以上结果提示,人胚胎脑海马区NSCs的体外存活增殖必须依赖于h-EGF和h-bFGF的共同作用,而h-LIF对早期培养的人NSCs的影响不明显.