毒理学——鬼臼毒素-固体脂质纳米粒的皮肤毒理学实验

摘要

考察鬼臼毒素-固体脂质纳米粒经皮肤用药的安全性．选择Wistar大鼠140只，Fmrnu豚鼠78只．采用改良的乳化蒸发．低温固化法制备5，50mg／L鬼臼毒素一固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒．①取豚鼠48只，按随机数字表法分成5，50mg／L鬼臼毒素一固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒完整皮肤组和破损皮肤组，每组4只，分别进行单次和多次给药皮肤刺激试验．，分别取5，50mg／L鬼臼毒素一固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒混悬液0．1mL均匀涂布于受试区，右侧为空白对照区，再以自制单层塑料薄膜和双层纱布封包受试区．分别于去除敷料和清洗受试物后1，24，48h观察涂药部位有无红斑和水肿等情况，以及上述变化的恢复情况与时间．多次给药方法：皮肤处理方法、观察指标及评价指标同上，每日给药1次，连续给药14d．②取大鼠140只，按随机数字表法分成5，50mg／L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒完整皮肤组和破损皮肤组、正常对照组，每组10只，分别进行急性和长期皮肤毒性试验．急性毒性试验方法：脱毛后，分别取5，50mg／L鬼臼毒素．固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒混悬液1mL均匀涂布于受试区，连续观察14d，每日观察大鼠体质量、进食量、皮肤、呼吸、体态、眼、中枢神经系统、四肢活动、粪便性状及死亡情况．长期毒性实验方法：皮肤处理方法及观察指标同上，每日给药1次，药量均为0．1mL，连续给药30d，末次给药后24h麻醉后处死动物，取血3～4mL进行血液学、血液生化学及皮肤病理检查．③取豚鼠30只，按随机数字表法分成50mg／L鬼臼毒素．固体脂质纳米粒组、阴性对照组及阳性对照组，每组10只，进行皮肤变态反应试验．脱毛后，3组左侧脱毛区分别涂50mg／L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒混悬液、空白固体脂质纳米粒混悬液及10g／L-四二硝基氯苯0．1mL，涂药后以自制单层塑料薄膜和双层纱布封包受试区，6h后去除敷料和清洗受试物．第7天和第14天，以同样方法各重复1次，共3次．于末次给受试物致敏后14d，将受试物0．1mL涂于豚鼠背部右侧脱毛区，6h后去掉受试物，即刻观察皮肤变态反应情况，之后于24，48，72h再次观察皮肤反应．纳入大鼠140只，豚鼠78只，均进入结果分析：①单次和多次给予鬼臼毒素．固体脂质纳米粒对豚鼠完整和破损皮肤均无刺激作用．②单次大剂量给予5mg／L鬼臼毒素．固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒，未见对大鼠有急性毒性反应．给予50mg／L鬼臼毒素．固体脂质纳米粒组大鼠分别于给药后的前3-8d出现体质量减轻、食欲下降等全身中毒症状，尤以皮肤破损组表现较明显，以后逐渐恢复；每日小剂量给予5mg／L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒，未见对大鼠有明显长期毒性反应．③给予50mg／L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒组大鼠于给药后的18~25d，均出现轻度的皮肤红斑、水肿、糜烂和结痂等炎症反应，于停药后1周内消退，皮肤组织病理学检查可见以表皮为主的急性炎症反应；鬼臼毒素-固体脂质纳米粒对豚鼠皮肤无致敏性．研究认为：在有效观察时间和一定质量浓度范围内，鬼臼毒素-固体脂质纳米粒对豚鼠皮肤无刺激性及致敏性，对破损皮肤大鼠应用50mg／L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒大剂量时易出现全身急性中毒反应而完整皮肤及5mg／L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒应用则较安全，小剂量长期应用鬼臼毒素-固体脂质纳米粒对大鼠比较安全无系统吸收毒性，但应用50mg／L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒时可以出现轻度的皮肤炎症反应．