补肾活血方含药血清对过氧化氢诱导大鼠髓核细胞焦亡的作用

摘要

目的探讨补肾活血方含药血清对过氧化氢诱导大鼠髓核细胞焦亡的作用。方法随机选取5只SD大鼠,灌胃给予3.597 g/kg补肾活血方,眼球取血,分离得含药血清;其余9只大鼠分离提取髓核细胞。用含0,5%,10%,20%,40%,80%,100%补肾活血方含药血清与髓核细胞孵育24 h,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定细胞活力。将髓核细胞随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)及含药血清低、中、高剂量组(C_(1)组、C_(2)组、C_(3)组)。A组加入无血清培养基;B组加入400μmol/L过氧化氢;C_(1)组、C_(2)组、C_(3)组分别预先用5%,10%,20%含药血清处理2 h,再用400μmol/L过氧化氢孵育4 h。采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定其细胞活性,采用酶联免疫吸附法测定细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)的表达水平,采用蛋白免疫印迹法测定细胞中p17、p20、半胱天冬蛋白酶1(caspase-1)、含NLR家族Pyrin域蛋白(NLRP3)、Gasdermin D(GSDMD)、Beclin 1、Rab5、Rab7、LC_(3)Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达水平,采用丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒分别测量细胞中MDA和GSH的含量及SOD的活性。结果与补肾活血方含药血清的培养基比较,5%,10%,20%含药血清培养基中细胞活力差异不显著(P>0.05)。与B组比较,C_(1)组、C_(2)组、C_(3)组细胞上清液中IL-1β和GSDMD-NT,p17,p20,LC_(3)Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达水平均显著减低,MDA含量显著减少(P<0.05);与B组比较,C_(2)组、C_(3)组细胞上清液中SOD活性和Rab5,Rab7蛋白的表达水平均显著升高,GSH含量显著增加(P<0.05)。结论补肾活血方抑制了过氧化氢诱导大鼠髓核细胞的焦亡、NLRP3炎性小体的活化及氧化应激,促进了细胞自噬。但其物质基础复杂,主要活性成分和作用机制仍不清楚,有待进一步深入研究。