白眉蝮蛇去整合素rAdinbitor对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞黏附与增殖的影响

摘要

背景与目的:蛇毒去整合素是一类从多种蛇毒和水蛭中分离到的含RGD(Arg-Gly-Asp)或KGD(Lys-Gly-Asp)模体的小分子蛋白质,其由于能竞争性地结合细胞表面的整合蛋白受体,阻断肿瘤细胞与细胞外基质的黏附,从而发挥抗肿瘤转移的作用.rAdinbitor是我实验室采用基因克隆方法从大连产白眉蝮蛇(Gloydius blomhoffi brevicaudus)的毒腺中获得的一种含有RGD模体的去整合素.本实验的目的是探讨rAdinbitor对人肝癌细胞系SMMC-7721黏附、增殖的抑制作用,为rAdinbitor抗肿瘤转移的作用机制提供实验依据.方法:以细胞黏附实验观察纤连蛋白(FN)基质对SMMC-7721细胞黏附的影响.分别采用结晶紫染色法和MTT比色法测定重组蛋白rAdinbitor对SMMC-7721向FN黏附的影响,及对已黏附于FN上的SMMC-7721的影响.以MTT比色法检测不同浓度的rAdinbitor对SMMC-7721细胞增殖的影响;HE染色观察200μg/ml Adinbitor诱导SMMC-7721细胞36h凋亡的形态变化;采用流式细胞仪检测rAdinbitor对细胞凋亡的诱导作用.结果:① rAdinbitor对SMMC-7721细胞在FN基质上的黏附有一定的抑制作用,并呈浓度依赖关系,25、50、100、200μg/ml浓度组rAdinbitor的黏附抑制率分别为4.90% 、11.73%、 22.84%、 37.28%,各组差异有显著性(P＜0.05).② rAdinbitor作用后,已黏附的SMMC-7721细胞变圆、脱落,各浓度组黏附细胞的存活率的平均值分别为98.89%、 90.01%、 63.37%、 35.13%,细胞的增殖受到明显抑制(P＜0.05).③ rAdinbitor对SMMC-7721细胞的增殖具有较强的抑制作用,且随着药物浓度的增加,其抑制作用增强(P＜0.05).rAdinbitor对SMMC-7721细胞作用48h的IC50值为177.83μg/ml.④ 200μg/ml rAdinbitor作用SMMC-7721细胞36h呈现早期细胞凋亡的形态改变,凋亡率达20.68%,明显高于未经处理的对照组的2.38%(P＜0.05).结论:重组白眉蝮蛇去整合素rAdinbitor能够剂量依赖性地抑制SMMC-7721细胞在FN上的黏附,并促使已黏附的SMMC-7721细胞脱落,剂量依赖性抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡.