组织蛋白酶E氨基端催化性残基的确定

摘要

目的 验证组织蛋白酶E保守基序DTG中第98位天门冬氨酸残基为组织蛋白酶E氨基端催化性残基.方法 通过基因定点突变技术将第98位天门冬氨酸残基用丙氨酸替代,制成变异体D98A,并将野生型和变异型的大鼠组织蛋白酶E基因在人胚胎肾293T细胞中进行异源表达.结果 在细胞培养基和细胞提取物中都发现有野生型和变异型的大鼠组织蛋白酶E的酶原蛋白表达.突变体D98A酶原在酸性条件下不能转变为酶,也没有酶活性.结论 组织蛋白酶E第98位天门冬氨酸残基是酶的催化性残基,对酶的催化活性非常重要.