慢病毒介导I型胶原短发夹RNA转染对大鼠系膜细胞生长行为的影响

摘要

目的通过观察慢病毒介导的I型胶原（COLI）短发夹（sh）RNA感染大鼠系膜细胞后其增殖、凋亡及细胞周期的变化，探索未来应用于动物实验，甚至临床时RNA干涉（RNAi）药物对靶细胞生长行为的影响。方法利用感染增强剂（对照组）、空慢病毒载体及感染增强剂（pSC-GFP组）、COLIshRNA慢病毒表达载体及感染增强剂（pSC—GFP／COLI组）分别感染大鼠系膜细胞，用噻唑蓝法检测细胞增殖，利用AnnexinV／PE法检测细胞凋亡，利用流式细胞仪检测细胞周期，进而观察慢病毒表达载体对细胞上述能力的影响。结果pSC—GFP／COLI组和pSC—GFP组均能显著抑制细胞增殖，且慢病毒表达载体抑制能力又显著高于空病毒，分别于感染后24h、48h和72h计算抑制效率为22．52％、28．57、33．33％。凋亡实验结果表明，慢病毒感染细胞后一定程度诱导了细胞凋亡，但作为载体携带的COLIshRNA未引起进一步的细胞凋亡加剧。细胞周期实验发现慢病毒引起细胞周期阻滞于G2／M期。而在72hCOLIshRNA对s期的阻滞逐渐突出。结论慢病毒介导I型胶原短发夹RNA转染大鼠系膜细胞后，在一定程度上影响了细胞生长行为，但总体来说仍是安全的，为进一步动物实验及药物研制奠定基础。