防风中5-O-甲基维斯阿米醇苷对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型的抗炎作用研究

摘要

目的 研究中药防风中5-O-甲基维斯阿米醇苷对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7细胞炎症的保护作用及其作用机制。方法 建立LPS诱导小鼠RAW264.7细胞体外炎症模型,采用MTT比色法测定不同浓度(160、80、40、20、10μmol/L)5-O-甲基维斯阿米醇苷对小鼠RAW264.7细胞活性的影响;实验分空白组,LPS组,阳性对照组(吲哚美辛,10μmol/L),5-O-甲基维斯阿米醇苷低(20μmol/L)、中(40μmol/L)、高(80μmol/L)剂量组,空白组、LPS组加入空白培养基,其余给药组加入相应药物,2h后加入LPS(10μg/mL),采用格里斯试剂法检测小鼠RAW264.7细胞上清液的一氧化氮(NO)的分泌,酶联免疫吸附试验法检测小鼠RAW264.7细胞中的前列腺素E_(2)(PGE_(2))、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,RT-qPCR检测小鼠RAW264.7细胞核因子-κB(NF-κB)p65、白细胞介素1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)的mRNA表达,Western blot检测Toll受体4(TLR4)、NF-κB p65蛋白表达。结果5-O-甲基维斯阿米醇苷(10~80μmol/L)对小鼠RAW264.7细胞活性无明显影响。与空白组比较,LPS组小鼠RAW264.7细胞NO、PGE_(2)、TNF-α含量升高(P<0.01),NF-kB p65、IL-1β、INOS、COX-2的mRNA表达及TLR4、NF-κB p65蛋白表达增加(P<0.01);与LPS组比较,5-O甲基维斯阿米醇苷低、中、高剂量组R小鼠AW264.7细胞中NO、PGE_(2)、TNF-α含量均降低(P<0.01),NF-κB p65、IL-1β、INOS、COX-2的mRNA表达和TLR4、NF-κB p65蛋白表达均降低(P<0.01)。结论 防风中5-O甲基维斯阿米醇苷能抑制LPS诱导小鼠RAW264.7细胞炎症反应,具有一定的抗炎作用。