永生大鼠肝星状细胞系的建立及鉴定(英文)

摘要

目的建立永生性大鼠肝星状细胞(hepaticstellatecell,HSC)系。方法采用改良胶原酶原位灌注法消化肝脏,经Nycodenz密度梯度离心分离、鉴定成年Sprague-Dawley大鼠的HSC。然后通过细胞克隆建立HSC系(HSC-PQ)并传代培养。结合细胞动力学、光镜、透射电镜及免疫细胞化学技术检测HSC-PQ系的倍增时间、(平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA)及结蛋白表达、细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)合成等表型特征。结果分离获得的HSC约为2×107细胞/只大鼠,细胞成活率>95%,纯度>90%,培养2周后几乎所有HSC均已活化。在此基础上经细胞克隆所得的HSC-PQ系表型类似成纤维细胞,倍增时间约75h,可表达结蛋白、α-SMA以及除IV型胶原外的多种ECM成分(I型胶原、III型胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白等),且传代过程中增殖、ECM表达等特性均保持稳定。该细胞系已在体外培养32代(1a以上),提示其具有永生性。结论已成功建立永生性大鼠HSC系,该细胞系的基本特征与活化的原代HSC相似。