重组AAV1/hFIX病毒制备及其体外转导培养细胞的实验研究

摘要

目的 制备携带人凝血因子IX基因的重组AAV1病毒(rAAV1/hFIX),体外转导C2C12细胞并检测hFIX的表达.方法 通过"一株栽体细胞/一株辅助病毒"的双因素包装策略制备出rAAV1/hFIX,体外转导C2C12细胞后,检测细胞上清中FIX的表达量.结果 制备出了高纯度的rAAV1/hFIX病毒,转导C2C12细胞24 h后在上清中即可检测到hFIX,连续检测了120 h都有表达,24 h最高表达量高达到(68.0±3.2)ng/24h.结论 制备的rAAV1/hFIX病毒在体外培养细胞中能高水平表达hF1X,为应用基因治疗裁体治疗血友病B的体内实验奠定了基础.