稳定表达人巨细胞病毒pUL49蛋白人胚肺成纤维细胞系的建立

摘要

目的 用逆转录病毒载体介导的基因转移方法,建立稳定表达人巨细胞病毒(HCMV)UL49基因的HELF细胞系.方法 首先应用KT-PCR从感染HCMV的HELF细胞RNA中扩增UIA9基因,克隆到逆转录病毒载体pLEGFP-N1上,以此构建重组逆转录病毒栽体pLEGFP-N1-FLAG-uL49,并转染AmphoPackTM-293细胞,收集逆转录病毒,感染HELF细胞,经G418抗性筛选出阳性细胞.结果 经IFA、KT-PCK及Wcstem blot检测到UIA9基因在稳定细胞系中表达.结论 HELF-PLEGFP-N1-FLAG-UL49稳定细胞系构建成功.此细胞系为进一步研究HCMV pUL49蛋白的功能提供了一个有力工具.