几种灵芝rDNA基因间隔序列分析与鉴定

摘要

目的 基于基因间隔序列(ITS)序列对灵芝进行分类.方法 培养灵芝、提取DNA、优化聚合酶链反应(PCR)体系、纯化与克隆、测序、构建遗传进化树、进行遗传分析.结果 经过一系列的梯度实验得知优化的PCR体系为25μ1反应混合物中含模板DNA 25 ng、Mg2+为2.0 mmol/L、dNTPs 200μmol/L、Taq 1.5 U、引物为20 pmol;最佳反应程序为93℃预变性4min,93℃变性40 s,59℃退火40 s,72℃延伸1min,共35个循环,72℃继续延伸7rnin,4℃无限循环.所采用的HZ002、DZ003、NZ004和XC005在遗传进化树上面十分接近,说明其可以划分为同一菌属,同属于灵芝菌属.结论 基于ITS序列对灵芝进行分类,与其他的分子标记技术所取得的分类结果一致,证实依据ITS序列来对真菌菌属进行分类是十分合理的.