MicroRNA-181b及Toll样受体4在新生大鼠r神经元缺氧缺血损伤中的作用机制研究

摘要

目的 观察MicroRNA-181b(miRNA-181b)及Toll样受体4(TLR4)对新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)的影响并探讨其潜在机制.方法 选取3只1～2日龄新生大鼠脑皮质神经元细胞原代培养7 d,分为对照组和HIBD组.CKK-8法测定原代培养的脑皮质神经元细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,瞬时转染调节细胞内miRNA-181b及TLR4表达.双荧光素酶实验检测miRNA-181b对TLR4基因的靶向调控,SYBR Green实时荧光定量PCR观察miRNA-181b及TLR4 mRNA表达变化.Western blot观察TLR4蛋白在不同组别神经元细胞中的表达.结果 与对照组比较,miRNA-181b在新生大鼠缺氧缺血损伤神经元细胞中表达降低(P<0.05),miRNA-181b mimic转染后过表达miRNA-181b能抑制缺血缺氧对新生大鼠神经元细胞的损伤(P<0.05).双荧光素酶实验证实miRNA-181b可与TLR4 mRNA 3'-UTR直接结合,发挥对TLR4转录后翻译的抑制作用.进一步机制研究发现,si-TLR4转染后抑制TLR4表达能增加细胞活性,而miRNA-181b抑制剂anti-miRNA-181b转染后降低细胞活性,anti-miRNA-181b与si-TLR4共转染能部分逆转神经元细胞缺血缺氧下的损伤(P<0.05).结论 新生大鼠HIBD神经元细胞中miRNA-181b能够负性调控TLR4表达发挥一定的神经保护作用.