大鼠肝脏3 Alpha-羟类固醇脱氢酶cDNA的克隆与表达

摘要

目的克隆大鼠肝脏3 Alpha-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)cDNA,构建大肠杆菌表达质粒pET-30a/3α-HSD,并诱导表达含6个组氨酸标记的pET-30a/3α-HSD融合蛋白.方法从大鼠肝脏组织中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出大鼠3α-HSD cDNA,克隆于pGEM-T载体中,测序筛选后,将正确序列的3α-HSD基因Bam H Ⅰ/Xho Ⅰ片段定向插入融合基因表达载体pET-30a的相应克隆位点上,构建重组质粒pET-30a/3α-HSD,并转化大肠杆菌BL21-Gold(DE3)pLysS.结果和结论 pGEM-T/3α-HSD序列分析发现,获得的大鼠肝脏3α-HSD cDNA在起始密码后的第814位碱基由T突变为C,与文献报道的仅一个碱基差别.构建的表达载体pET-30a/3α-HSD在大肠杆菌BL21-Gold (DE3)pLysS中能表达出融合蛋白,为进一步实验研究和临床应用创造了条件.