细菌鞭毛蛋白质fliH的表达及热稳定性分析

摘要

目的:通过对鞭毛蛋白质fliH的克隆表达及热稳定性分析,为深入分析细菌感染的分子机制以及新的特异性抗菌药物和快速诊断方法的研发提供基础.方法:利用PCR技术扩增fliH基因,构建重组质粒pET-28a-fliH-His6,并在大肠杆菌(Escherichia coli,Ecoli)B834中表达.运用亲和层析柱纯化fliH蛋白质,再用凝胶层析柱分析其在溶液中的聚集状态,TSA法分析其热稳定性.结果:(1)重组质粒pET-28a-fliH-His在E.coliB834中可溶性表达.(2)获得高纯度的fliH蛋白质(85％),以二聚体形式存在于溶液中.(3) fliH蛋白质在溶液中稳定存在的最适条件为pH6.0和NaC1200mM.结论:fliH蛋白质能够在溶液中以二聚体形式稳定存在,为深入认识鞭毛蛋白质在细菌致病过程中的相关分子机制及确切的生化功能奠定基础,从而为新的特异性抗菌药物及快速诊断方法的研发提供理论支撑.