探究粪肠球菌CylA在鼠脑微血管内皮细胞中的表达及验证

摘要

为探究粪肠球菌CylA基因对血脑屏障的影响,本试验选取粪肠球菌的CylA为目的基因,用PCR技术获取CylA基因片段与pMD@19-TSimpleVector过夜连接后转化至Dh5α中,经含Amp培养基筛选后进行PCR扩增并鉴定,对阳性菌株进行培养并提取其质粒,用酶BamhⅠ和酶XhoⅠ对提取的质粒和pcDNA3.1/Myc-his分别进行双酶切,将阳性质粒转染至鼠脑微血管内皮细胞中。采用实时荧光定量PCR和WesternBlot技术对鼠脑微血管内皮细胞中CylA的表达进行检测及验证。结果显示,CylA全长约707bp。重组真核质粒经双酶切后分别得到一条5500bp和700 bp左右的条带。荧光定量结果显示,CylA基因42 h差异不显著(P> 0.05);30、36、48 h差异显著(P <0.05),且36 h的表达量最低。同时WesternBlot也扩增出阳性条带。由此可知,粪肠球菌CylA基因可在鼠脑微血管内皮细胞中表达,并呈现先下降后上升的趋势。本试验为进一步研究其致病机制提供理论参考。