牛血清白蛋白和辣根过氧化物酶脱碘结合物对甲状腺激素免疫测定的影响

摘要

甲状腺素（T4）和3，5，3’-三碘甲状腺原氨酸（T3）的酶联免疫吸附试验（ELISA）涉及2个方面：半抗原与羧基载体蛋白偶联制备抗体；与氨基偶联制备检测标签。为提高抗体的效价和特异性，T4与T3氨基乙酰化后，免疫原可直接或通过己二酸二酰肼（ADH）将羧基偶联到牛血清白蛋白（BSA）上。直接偶联导致每分子BSA结合40～50mol T3和T4，这有助于提高特别是T4的免疫反应和特异性。免疫原的高抗原表位密度诱发更好的抗体反应，ADH的连接物为间隔臂，引入18～27mol半抗原与载体蛋白结合，对抗体的制备影响较小，但T3例外。通过制备甲酸酯将辣根过氧化物酶（HRP）和T4氨基基团直接偶联来制备检测标签，其通过与抗N-乙酰化-T4和T3的抗体结合可建立灵敏度曲线。不像甲基酯，T4-HRP和T3-HRP表现出较高的敏感性，似乎与标签结合抗体的亲和力有关。