AANAT基因在滩羊不同繁殖时期卵巢中的转录差异及DNA甲基化程度分析

摘要

试验旨在检测5-羟色胺-N-乙酰基转移酶(AANAT)基因在绵羊休情季节和繁殖季节(卵泡期和黄体期)卵巢组织中的转录差异,并分析转录差异是否由DNA甲基化修饰程度改变所导致.试验采用自然环境条件和饲养管理一致,且体重差异在0.5 kg范围内的空怀母滩羊作为试验动物,采集其休情期、卵泡期和黄体期(每个时期3只)的卵巢组织,采用SYBR染料法进行实时荧光定量PCR检测AANAT基因在滩羊不同繁殖时期卵巢组织中的转录水平.随后针对转录水平有差异的两个时期(休情期和卵泡期)的样本,利用MethPrimer2.0在线软件预测AANA T基因启动子区和第一外显子区的CpG岛;用重亚硫酸盐测序法(BSP法)检测AANA T基因启动子区及第一外显子区的甲基化程度.试验结果显示,滩羊休情期卵巢组织中AANA T基因转录水平显著低于卵泡期的AANAT基因转录水平(P＜0.05),休情期与黄体期滩羊卵巢组织中AANA T基因的转录水平差异不显著(P＞0.05).滩羊卵巢组织中AANAT基因启动子区上存在着一个长度为173 bp的CpG岛,第一外显子区存在着一个长度为118 bp的CG岛.然而,两个甲基化岛区内的单个CpG位点甲基化程度在滩羊休情期和卵泡期之间均不存在显著差异,暗示AANA T基因的表达受甲基化修饰外的因素调控.本研究结果可为进一步探讨AANAT基因在季节性发情和卵泡成熟中的功能提供参考资料.