Visualization of bHLH transcription factor interactions in living mammalian cell nuclei and developing chicken neural tube by FRET

摘要

基本 helix-loop-helix (bHLH ) 的成员基因家庭在脊椎动物神经发生起重要作用。在这研究，共焦的基于显微镜学的荧光回声精力转移(烦恼) 被用来在各种各样的生理的条件下面监视 bHLH 蛋白质蛋白质相互作用。织物特定的 bHLH 使活跃之物， NeuroD1， Mash1， Neurogenin1 (Ngn1 ) ， Neurogenin2 (Ngn2 ) ，和无所不在的表示 E47 蛋白质与提高的黄荧光蛋白质(EYFP ) 被标注并且分别地提高了青色荧光蛋白质(ECFP ) 。潜水艇 bHLH 熔化蛋白质的细胞的本地化和活动性在 HEK293 房间被检验。由短暂 transfection 并且在 ovo electroporation，四织物特定的 bHLH 使活跃之物和 E47 蛋白质在 HEK293 房间和发展中的小鸡胚胎是过去表示的神经试管。与漂白的领受人相片方法，烦恼能在 transfected 的原子核在这些 bHLH 蛋白质对之间被检测房间和发展中的神经试管。Mash1/E47 和 Ngn2/E47 烦恼对更高出现烦恼效率在中间并且小鸡胚胎的侧面的一半神经试管分别地。它建议这些 bHLH 蛋白质对在特定的区域与他们的下游的目标基因的规章的元素形成了功能的 DNA 蛋白质建筑群。这个工作将帮助一个在 vivo 理解 bHLH 因素的行为。