抗人骨唾液蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

摘要

目的制备高亲和力、高特异性的抗人骨唾液蛋白（BSP）单克隆抗体（mAb）,并对其生物学特性进行鉴定,为BSP作为乳腺癌骨转移临床诊断靶点的研究奠定基础。方法重组BSF蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,经筛选建立可稳定分泌抗BSP mAb细胞株,制备腹腔积液,Protein G纯化。ELISA检测抗体的效价和亲和力,并用亚型鉴定试纸条鉴定mAb的亚型。应用Western blotting检测mAb的特异性,进一步利用纯化的mAb经免疫组织化学法检测乳腺癌细胞MDA-MB-231中BSP的表达情况。结果获得9株抗BSP mAb细胞株,选择其中2株（D001和D002）进一步鉴定,其上清效价分别为1:5120和1:10 240,腹腔积液效价分别为1:25 600和1:51 200。2株抗体亚型均为IgG1型,轻链均为κ型。Western blotting结果均在预期位置出现阳性条带。利用此2株细胞株所得抗体均可在乳腺癌细胞MDA-MB-231中检测到BSP的表达。结论成功制备能特异性识别BSP的mAb,为进一步研究BSP的生物学功能以及对BSP作为乳腺癌骨转移的标志物进行临床评价奠定基础。