过表达Spt7对黑曲霉生长及抗逆性影响

摘要

SAGA复合体是一种多功能蛋白复合物,负责细胞内10%以上的基因转录。Spt7作为SAGA复合体的核心蛋白,维持SAGA复合体的稳定。除酵母之外的真菌中并未有Spt7相关的研究报道。本研究对不同黑曲霉、丝衣霉等丝状真菌来源的Spt7的氨基酸序列进行多序列比对及蛋白结构的分析,发现Spt7在不同物种一致性较低,但均存在保守型的Bromo结构域。以黑曲霉1062为出发菌株,通过农杆菌转化法将过表达spt7的质粒转入1062菌株中,获得黑曲霉OE spt7转化子。通过对OE spt7转化子及对照组在CM培养基生长形态进行观察分析发现,过表达Spt7有益于菌体的生长及分生孢子的生成,在72 h时OE spt7转化子和对照组的菌落直径分别达到2.9 cm和2.8 cm,且转化子的孢子数量达到(5.8-6.3)×10^(7)/cm^(2),较对照组(2.3×10^(7)/cm^(2))提高1.5-1.7倍,且转化子菌丝分支较对照组多。另外,与对照组相比,OE spt7转化子在15 mmol/L H_(2)O_(2)条件下孢子萌发更快,菌落直径是对照组4倍,且在15%NaCl高渗以及39℃高温的条件下较对照组生长更加鲜活。通过qRT-PCR分析参与菌体抗氧化胁迫的过氧化物酶及耐高温的热休克蛋白基因的转录水平,发现除了CatR转录水平下调3.56倍,其他的过氧化物酶SOD、CpeB、GPX分别上调了3.8、1.89、3.56倍,除Hsp40及Hsp70较对照组无显著差异,Hsp90的转录水平上调19倍。