人载脂蛋白A1的表达、纯化与羊多抗血清制备

摘要

目的:载脂蛋白A1(ApoA1)可促进胆固醇的代谢,作为动脉硬化预防因子而受到重视,在临床检测中具有重要意义。目前载脂蛋白A1测定试剂盒在各大医院普遍使用的是进口试剂,检验成本高。本研究旨在为国产载脂蛋白A1检验试剂的研发提供理论基础。方法:将载脂蛋白A1基因克隆至p ET-28a载体进行表达,利用离子交换层析与Ni-NTA亲和层析方法纯化目的蛋白,纯化后的载脂蛋白A1免疫山羊,获得羊多抗血清。结果:重组载脂蛋白A1以可溶形式表达,纯度达到95%以上,将纯化后的载脂蛋白A1免疫山羊,间接ELisa免疫效价达到1∶100000以上,经双向扩散法测定效价达到1∶16。结论:本文制备的羊抗血清可用于载脂蛋白A1的检测,可为ApoA1检测试剂盒提供技术参考。