精子发生调控因子重组人HSF5的原核表达、活性检测与结构预测

摘要

目的 表达可溶性重组人源热休克转录因子5(rhHSF5)蛋白,并对其与热休克元件(HSEs)结合的结构模型进行预测.方法 将目的基因克隆到表达载体pET-22b(+)上,然后将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,挑取单克隆,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.通过Ni-NTA亲和层析、Superdex 75分子筛层析纯化后,获得重组蛋白.与包含HSEs的DNA片段进行凝胶迁移实验,并通过同源建模和分子动力学模拟研究方法对其与HSEs结合的结构进行模拟和预测.结果 获得可溶性人源HSF5蛋白的表达;经纯化得到高纯度、可结合HSEs的重组蛋白;凝胶迁移实验可见它与含HSEs的寡聚核苷酸有结合.结论 可溶性的人源HSF5蛋白可在原核系统中表达,为进一步研究HSF5的功能机制提供了基本条件.