小鼠神经元中表皮生长因子信号转导通路的动力学特征

摘要

目的研究表皮生长因子(EGF)在神经元信号转导中蛋白质的磷酸化修饰及其动力学特征.方法培养乳小鼠神经元,采用32P-NaH2PO4标记,加入EGF(20 μg/L)作用不同时间后液氮终止反应,经双向电泳、放射自显影获得磷酸化蛋白质的电泳分离图谱,利用PDQuest 2D分析软件进行图像分析,结合Swiss-Prot蛋白质数据库对磷酸化蛋白质斑点进行定性分析.结果双向电泳图谱显示了100多个磷酸化蛋白质斑点,对其中40个斑点的初步分析表明,它们包括多种蛋白激酶、酪氨酸蛋白磷酸酶、转录因子、翻译起始因子和胞内信号分子等.其中有17个磷酸化蛋白质为信号转导相关分子,随EGF作用时间的不同其磷酸化水平发生改变.时间动力学曲线显示,EGF刺激下,神经元中重要的信号分子MEK1、PKCα及ERK2的活化均呈峰形曲线,在5 min或20 min达最大值,以后迅速下降;PI3K调节亚基的二磷酸化水平在60 min达最大值.结论EGF在神经元的信号转导中具有信号整合与复杂自适应控制的特征.