RNAi抑制Survivin基因表达增加细胞凋亡

摘要

目的 构建RNAi表达载体,并检验其对基因的抑制效果,从而在细胞中研究SURVIVIN基因的功能.方法 (1)PCR扩增小鼠肝组织中的MU6启动子,并将其连接到TA载体中,构建带有MU6启动子的RNAi载体ps,并构建重组质粒psSURVIVIN和对照载体psN.(2)将psSURVlVIN及psN分别转染入HeLa细胞中,经过稳定筛选细胞,流式细胞术分析各组细胞周期及细胞凋亡率的影响因素,Western-blot和细胞免疫荧光检测两组细胞SUR-VIVIN蛋白质表达情况.(3)Caspase-Glo(tm)3/7 Assay Reagent检测两组HeLa细胞caspase 3/7的活性.结果 (1)细胞凋亡率,psSURVWIN组明显高于psN组与对照组;细胞阻滞在G0/G1期(P<0.01).(2)在HeLa细胞中,转染带有MU6启动子的抑制Survivin基因表达的RNAi载体质粒(psSURVIVIN),Survivin基因表达明显降低(P<0.01),其抑制率在70%以上.(3)psSURVIVIN组caspase 3/7的活性明显增强(P<0.05).结论 构建的RNAi载体psSURVMN能有效抑制SURVIVIN基因的表达,caspase 3/7的活性明显增强.