梭梭HabHLH74转录因子基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

摘要

利用分子生物学技术从梭梭中克隆了HabHLH74转录因子基因,在大肠杆菌中表达HabHLH74蛋白,旨在为梭梭抗逆分子机理提供研究基础.研究结果表明:①利用RT-PCR技术成功扩增了HabHLH74的完整编码区cDNA序列,HabHLH74编码区cDNA序列长度为1 218 bp.根据HabHLH74编码区序列预测出其编码蛋白的理化性质.②成功构建了HabHLH74基因的原核表达载体pET28a(+)-HabHLH74,并在大肠杆菌中成功表达了梭梭HabHLH74蛋白,其分子量为43.6 kDa.③对诱导条件进行单因素试验后获得的最佳诱导表达条件:诱导剂IPTG浓度为0.5 mmol/L,诱导温度为37℃,诱导时间为6h.④对在优化条件下诱导后的菌体进行超声破碎后发现梭梭HabHLH74蛋白主要以包涵体形式存在;降低诱导温度(16℃、25℃诱导)未能得到可溶性表达的梭梭HabHLH74蛋白.