异丙酚抑制内质网应激减轻脂多糖诱导人肝细胞损伤的机制研究

摘要

目的 探讨异丙酚(PPF)对脂多糖(LPS)诱导人正常肝细胞L-02损伤的保护作用.方法 用不同浓度的LPS来制备人肝细胞损伤模型,将人正常肝细胞L-02按随机数字表法分为五组:正常组、LPS组、LPS+25、50μmol/L PPF组以及LPS+4 mmol/L 4-苯基丁酸(PBA)组.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测L-02细胞的存活率,酶联免疫吸附测定(ELISA)测定各组细胞上清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞中炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达;蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组细胞中核因子-κB(NF-κB)p65、NF-κB、p-肌醇依赖酶1α(IRE1α)、IRE1α和激活转录因子6(ATF-6)蛋白的表达.结果 用不同浓度的LPS处理的人肝细胞存活能力显著降低,且LPS致人肝细胞损伤的最佳造模条件为20 mg/L孵育24 h.与正常组比较,LPS组的人肝细胞存活能力显著降低,细胞数量减少且核固缩;细胞上清中ALT和AST的释放量分别增加[(69.17±5.51)mg/L和(50.23±5.81)mg/L比(19.78±1.79)mg/L和(9.79±0.96)mg/L,P<0.05];IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达显著升高;NF-κB p65表达量明显增强,且内质网应激相关蛋白p-IRE1α/IRE1α和ATF-6的表达显著增高[(2.24±0.28)和(2.55±0.16)比(1.00±0.17)和(1.00±0.26),P<0.05].与LPS组相比,给予低高剂量PPF能显著提高人肝细胞的存活率,降低ALT[(55.30±6.92)mg/L和(33.70±4.08)mg/L]和AST[(39.46±2.56)mg/L和(27.62±2.12)mg/L]的释放量;显著降低IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达;抑制NF-κB p65及内质网应激相关蛋白ATF-6和p-IRE1α/IRE1α蛋白水平的表达.结论 PPF对LPS诱导的人肝细胞损伤具有一定的保护作用,可能是通过抑制内质网应激从而发挥抗炎作用来实现的.