双硫仑螯合铜对耐紫杉醇乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡及自噬的影响

摘要

目的 探讨双硫仑螯合铜(DSF-Cu)对耐紫杉醇乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡及自噬的影响。方法 2018年1月至2019年10月,培养MCF-7人乳腺癌细胞和耐紫杉醇乳腺癌MCF-7/紫杉醇细胞,用定量紫杉醇持续诱导MCF-7/紫杉醇细胞维持耐药性。通过CCK-8法检测MCF-7/紫杉醇细胞耐药指数;通过CCK-8法检测MCF-7/紫杉醇细胞在不同浓度DSF-Cu(5、10、15、20、25μmol/L)干预不同时间(24 h和48 h)后的抑制率,并分析细胞抑制率与DSF-Cu浓度和作用时间的关系;通过划痕实验检测DSF-Cu对MCF-7/紫杉醇细胞迁移能力的影响;通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测MCF-7和MCF-7/紫杉醇细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和自噬效应蛋白Beclin-1基因和蛋白的表达,并在紫杉醇和DSF-Cu单药及联合干预MCF-7/紫杉醇细胞中后,检测Bcl-2、Bax和Beclin-1蛋白的表达;通过流式细胞计数技术检测不同浓度DSF-Cu(5、10、15、20μmol/L)干预MCF-7/紫杉醇细胞不同时间(12 h、24 h和48 h)后细胞凋亡情况。结果MCF-7和MCF-7/紫杉醇细胞在紫杉醇干预24 h后IC_(50)值分别为1 394.79μmol/L和321.42μmol/L,MCF-7/紫杉醇细胞耐药指数为4.34;在不同浓度DSF-Cu(5、10、15、20、25μmol/L)DSF-Cu干预MCF-7/紫杉醇细胞24 h后细胞抑制率分别为(27.42±3.38)%、(42.71±0.77)%、(57.52±7.10)%、(73.83±1.76)%、(85.55±2.25)%,48 h后细胞抑制率分别为(51.27±4.59)%、(57.34±5.94)%、(71.50±1.80)%、(81.54±4.36)%、(90.96±2.13)%,DSF-Cu以浓度与时间依赖性抑制乳腺癌MCF-7/紫杉醇细胞增殖(P<0.05);划痕实验证实DSF-Cu能抑制乳腺癌MCF-7/紫杉醇细胞迁移;qRT-PCR结果显示,与MCF-7细胞相比,MCF-7/紫杉醇细胞中Bcl-2和Beclin-1基因表达升高,Bax基因表达降低(P<0.05);蛋白质印迹法结果显示,与MCF-7细胞比较,MCF-7/紫杉醇细胞中Bcl-2和Beclin-1蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低(P<0.05)。MCF-7/紫杉醇细胞在紫杉醇和DSF-Cu单药及联合干预后Bcl-2表达分别为1.81±0.28、1.25±0.09、0.87±0.10,Bax表达分别为0.65±0.15、1.07±0.15、1.34±0.04,Beclin-1表达分别为1.53±0.22、0.85±0.18、0.53±0.08,MCF-7/紫杉醇细胞在DSF-Cu干预后Bax蛋白表达升高,Bcl-2和Beclin-1蛋白表达降低(P<0.05);流式结果显示不同浓度DSF-Cu(0、5、10、15、20μmol/L)干预MCF-7/紫杉醇细胞24 h后,细胞凋亡率分别为(5.50±1.01)%、(11.03±1.04)%、(55.12±5.06)%、(68.86±3.36)%、(80.07±4.30)%,在IC浓度的DSF-Cu干预MCF-7/紫杉醇细胞不同时间(0 h、12 h、24 h、48 h)后,细胞凋亡率分别为(4.47±0.57)%、(15.92±2.63)%、(34.85±2.70)%、(74.94±1.13)%,MCF-7/紫杉醇在DSFCu干预后细胞凋亡情况与DSF-Cu呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。结论 DSF-Cu可通过诱导凋亡、抑制自噬来抑制乳腺癌MCF-7/紫杉醇细胞增殖和迁移,逆转乳腺癌MCF-7细胞对紫杉醇耐药性。