电针“肠病方”对急性溃疡性结肠炎大鼠结肠自噬及AMPK/mTOR信号通路的影响

摘要

目的:观察电针“肠病方”对溃疡性结肠炎(UC)大鼠自噬水平和腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其治疗UC的作用机制。方法:雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、西药组和电针组,每组8只。采用自由饮用5%葡聚糖硫酸钠溶液7 d复制UC大鼠模型。电针组予双侧“天枢”“上巨虚”和“中脘”电针治疗,每次20 min,每日1次,连续3 d;西药组予美沙拉嗪悬液(200 mg/kg)灌胃,每日1次,连续3 d。观察并记录各组大鼠一般情况,记录粪便形态并进行隐血试验以评估疾病活动指数(DAI);HE染色法观察大鼠结肠形态及病理变化;ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-10的含量;荧光定量PCR法检测结肠组织自噬标志物微管相关蛋白3B(LC3B)、p62 mRNA的表达水平;Western blot法检测结肠组织中p62蛋白表达量及LC3BⅡ/LC3BⅠ、p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR比值。结果:与空白组比较,模型组大鼠一般情况较差,结肠黏膜屏障破坏,炎性细胞浸润,腺体萎缩或消失,隐窝数量减少,DAI评分升高(P<0.01),血清IL-6、TNF-α含量升高(P<0.01),IL-10含量降低(P<0.01),结肠组织中p62蛋白及mRNA表达水平、p-mTOR/mTOR比值均升高(P<0.01),LC3B mRNA表达水平及LC3BⅡ/LC3BⅠ、p-AMPK/AMPK比值均降低(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,电针组和西药组大鼠一般情况好转,结肠黏膜屏障缺损好转,炎性细胞浸润减少,腺体排列相对整齐,隐窝数量增加,DAI评分降低(P<0.01),血清IL-6、TNF-α含量降低(P<0.05,P<0.01),IL-10含量升高(P<0.01,P<0.05),结肠组织中p62蛋白及mRNA表达水平、p-mTOR/mTOR比值均降低(P<0.01),LC3B mRNA表达水平及LC3BⅡ/LC3BⅠ、p-AMPK/AMPK比值均升高(P<0.01)。与西药组比较,电针组结肠组织中p62 mRNA表达水平及LC3BⅡ/LC3BⅠ、p-AMPK/AMPK比值均升高(P<0.01,P<0.05),p-mTOR/mTOR比值降低(P<0.05)。结论:电针“肠病方”能改善急性UC大鼠症状,其作用机制可能与促进结肠细胞自噬、提高AMPK磷酸化水平、降低mTOR磷酸化水平相关。