针刺介导miR-34c-5p调控脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经细胞自噬的研究

摘要

目的:观察针刺对脑缺血再灌注损伤(CI/RI)大鼠缺血侧海马组织miR-34c-5p、自噬相关蛋白表达及凋亡率的影响,探讨针刺通过miR-34c-5p调控CI/RI大鼠海马神经细胞自噬的机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、药物组及针刺组,每组20只。采用线栓法制作大脑中动脉阻塞再灌注大鼠模型。假手术组只剥离血管,不插入线栓。针刺组针刺“大椎”“百会”“水沟”,每15 min行针1次,留针30 min;药物组腹腔注射依达拉奉(5 mg/kg);均1次/12 h,共7次。用改良Garcia评分法评估神经功能损伤程度,TTC法测定脑梗死面积百分比,透射电镜观察缺血侧海马区神经细胞超微结构,实时荧光定量PCR法检测海马miR-34c-5p的表达量,Western blot法检测海马Beclin-1、LC3B、p62的表达,TUNEL法检测缺血侧脑组织细胞凋亡率。结果:与假手术组比较,模型组Garcia评分明显降低(P<0.01),脑梗死面积百分比、细胞凋亡率明显升高(P<0.01),海马miR-34c-5p、Beclin-1、p62表达及LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,针刺组、药物组Garcia评分明显升高(P<0.01),脑梗死面积百分比、细胞凋亡率明显降低(P<0.01),海马miR-34c-5p、Beclin-1、p62表达及LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均升高(P<0.01,P<0.05)。与药物组比较,针刺组海马miR-34c-5p表达水平明显升高(P<0.01)。电镜结果显示,假手术组大鼠海马神经细胞结构正常;模型组大鼠神经细胞有明显病理变化;针刺组、药物组较模型组神经细胞损伤减轻,细胞呈轻度水肿,结构较完整,可见部分正常细胞器,仍可观察到自噬小体、自噬溶酶体及其包裹的细胞器。结论:针刺可改善CI/RI大鼠神经功能,减少脑梗死面积,可能与其上调miR-34c-5p进而调控细胞自噬抗凋亡有关。