慢病毒介导沉默NIPBL基因对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响

摘要

目的探讨慢病毒介导沉默NIPBL基因对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。方法将第三代c57小鼠骨髓间充质干细胞分为实验组、阴性对照组、空白对照组。将慢病毒载体转染至小鼠骨髓间充质干细胞,倒置荧光显微镜观察慢病毒转染结果,Real-time PCR检测NIPBL基因表达情况。成骨诱导培养,检测碱性磷酸酶活性,应用Real-time PCR、Western blot技术分别检测成骨相关基因OCN、BMP-2、RUNX-2基因转录及蛋白表达水平。结果实验组NIPBL mRNA表达量降低(P<0.05)。实验组碱性磷酸酶活性比阴性对照组及空白对照组低(P<0.05)。实验组OCN、BMP-2、RUNX-2基因转录及蛋白表达水平均较阴性对照组及空白对照组低(P<0.05)。茜素红染色结果提示阴性对照组和空白对照组较实验组可见更多的红色钙结节。结论慢病毒介导沉默NIPBL基因降低小鼠骨髓间充质干细胞增殖能力,抑制成骨分化相关基因的表达,降低成骨分化能力。