宫颈酸性磷酸酶CAP单克隆抗体的制备及CAP在早期宫颈癌筛查中的临床意义

摘要

目的制备出宫颈酸性磷酸酶蛋白(CAP)的单克隆抗体,并对其相关的生物学特性进行鉴定;同时应用Mark-Pap试剂盒检测患者宫颈涂片中的CAP表达,并与TCT制片诊断确诊结果进行比较。方法将CAP蛋白免疫Balb/c雌性小鼠,常规聚乙二醇介导融合,以间接ELISA方法筛选阳性克隆,有限稀释法亚克隆筛选单克隆细胞株,并使用秋水仙素对其核型进行鉴定,使用ISO-2鼠源单克隆抗体亚型检测试剂盒检测其亚类,并检测其效价、特异性等;用Mark-PAP试剂盒检测CAP蛋白在350例行常规妇科体检女性宫颈组织细胞中的表达,细胞内出现红色沉淀即为CAP阳性,并与TCT制片诊断确诊结果进行比较。结果筛选出能够稳定分泌抗CAP单抗的杂交瘤细胞株1B11和3C12,其单克隆抗体的亚型经鉴定为IgG2b和IgG1,抗体的效价在106以上;宫颈酸性磷酸酶在宫颈癌患者组织细胞中呈阳性表达,而正常的子宫颈上皮细胞及炎症细胞中无CAP表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本实验制备出了CAP蛋白单克隆抗体1B11和3C12;CAP在1例高度鳞状上皮内病变患者和1例确诊为早期宫颈鳞癌患者的组织切片中呈阳性表达,提示宫颈酸性磷酸酶在宫颈癌早期诊断中可能具有指导意义。